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第82章 培养菌种（第2页）

生物防水涂料中的人工细菌，就是利用生物信息学工具，从多种微生物中筛选出具有硅酸盐合成能力的基因片段，将这些基因片段逐一合成组装。

通过电穿孔仪将基因组导入枯草芽孢杆菌细胞中。

时间一到，他小心地取出已经灭菌好的培养基溶液，将培养基倒入几个无菌培养皿中，轻轻晃动，使琼脂均匀铺展在培养皿底部，待其凝固。

张君华打开培养箱，将培养皿整齐地放进去，设定好温度和时间。

孵育过程需要持续一段时间，接下来的工作就是等待枯草芽孢杆菌的生长。

一周的时间匆匆而过。

张君华站在一台最新款的Bio-RadC1000Touch?ThermalCycler前，屏幕上显示着一串复杂的基因序列。

手指在触摸屏上快速操作，选择了目标基因并设置了编辑参数。

他使用的是CRISPR-Cas9GeingKit，包含Cas9蛋白和特定的向导gRNA，这些RNA会引导Cas9蛋白在细菌基因组中找到并切割目标DNA序列。

这一步非常关键，需要确保每一个编辑点都准确无误。

张君华专注地盯着屏幕，手指飞快地操作着。

几分钟后，屏幕上显示出基因编辑完成的提示。

张君华按照实验步骤，将悬浮液转移到PCR管中，加入PCR反应液和引物。

这些引物是专门设计用来扩增目标基因的。

他仔细检查了每一管的反应体系，确认无误后，将PCR管放入PCR仪中，设定好扩增程序。

PCR仪开始运转，屏幕上显示出温度循环的过程。张君华知道，这个过程将经历数个循环，每一次循环都会将目标基因片段成倍扩增。

张君华站在一旁，目不转睛地看着PCR仪，心中默默祈祷实验能够成功。

经过一段时间，PCR反应结束了。

张君华取出PCR管，小心翼翼地将扩增后的样本转移到新的试管中。

将这些扩增产物送入基因测序仪进行测序，验证基因编辑的效果。

他走到基因测序仪前，将样本逐一放入样品槽，启动测序程序。

测序仪发出轻微的嗡嗡声，开始对样本进行高精度的测序分析。

张君华静静地站在一旁，等待结果的出现。

时间一点一点过去，随着数据的逐步显示，张君华的心情逐渐沉重起来。

测序结果表明，目标基因并没有如预期般成功插入细菌的基因组中。

相反，原本应该被替换的基因依然存在，目标基因片段没有正确嵌入。

“怎么会这样？”

张君华皱起眉头，喃喃自语道，“我明明按照标准操作流程进行的。”

回想起过去几天的辛苦努力和每一个细节的谨慎操作，张君华不禁感到一阵挫败。

他的脑海中飞速闪过各种可能的错误原因，从引物设计到PCR条件，再到基因编辑的具体步骤。

张君华重新查看测序结果，试图从中找出蛛丝马迹。

他的手指在键盘上快速敲击，调出更多数据进行比对分析。

然而，无论张君华怎样仔细地查看和分析，结果都是一样的：目标基因没有成功插入。